1 הקדמה

עודף משקל והשמנת יתר הפכו לבעיות בריאות עולמיות וקשורות מאוד למחלות לב כלילית, יתר לחץ דם והפרעות מטבוליות. חומרים היפוליפידמיים והיפוגליקמיים פרמצבטיים קיימים לעיתים קרובות מציגים תופעות לוואי, מה שמעורר עניין בחלופות בטוחות וטבעיות לוויסות רמת הגלוקוז והשומנים בדם.

אצות ים, פירות וירקות עשירים בתרכובות פעילות בעלות תכונות אנטי-דלקתיות, הורדות שומנים- והיפוגליקמיות.Sargassum fusiformeמציג פעילות נוגדת חמצון ומשקל-; כורכומין יכול לווסת את חילוף החומרים של שומנים; ל-punicalagin יש השפעות אנטי-דלקתיות והורדות שומנים-. בדיקה לאיתור -מעכבי גלוקוזידאז ומעכבי ליפאז בלבלב בין החומרים הפעילים הטבעיים הללו מספקת בסיס לפיתוח תכשירים טבעיים של היפוגליקמיה והיפוליפידמיה.

2 חומרים ושיטות

2.1 חומרים וריאגנטים

Sargassum fusiformeבמחקר זה נעשה שימוש בכורכומין, punicalagin, -glucosidase, lipase pancreatic porcine, PNPG, 4-MUO ומעכבים סטנדרטיים (acarbose ו-orlistat).

2.2 מכשירים

הופעלו מייבש הקפאה, מאייד סיבובי, צנטריפוגה מקוררת, חממת טמפרטורה- קבועה, קורא צלחות ומערכת מים טהורים במיוחד.

2.3 שיטות ניסוי

2.3.1 הכנת תמצית מימית Sargassum fusiforme

אצות לחות חולצו ביחס מוצק-נוזל של 1:50, חוממו ל-85 מעלות למשך 6 שעות, עברו צנטריפוגה ויובשו בהקפאה-לקבלת התמצית המימית.

2.3.2 -מבחן עיכוב גלוקוזידאז

השיטה הקולורימטרית PNPG שימשה לקביעת פעילות מעכבת.

2.3.3 בדיקת עיכוב ליפאז בלבלב

4-MUO שימש כמצע, ועוצמת הקרינה נמדדה כדי לחשב את רמות העיכוב.

2.3.4 ניסויים-יחידים

בהתבסס על יחסי IC₅₀ של שלושת החומרים הפעילים (150:6:2), נבחר טווח של יחסי מסה. בריכוז כולל של 0.5 מ"ג/מ"ל, שיעורי העיכוב כנגד שני האנזימים נקבעו עבור כל יחס.

2.3.5 עיצוב משטח תגובה

עיצוב RSM של שלושה-גורמים, שלוש-רמות העריך את ההשפעות של שלושת יחסי המרכיבים על עיכוב האנזים כדי לקבוע את הנוסחה המרוכבת האופטימלית.

3 תוצאות וניתוח

3.1 השוואה של ערכי IC₅₀

Punicalagin הראה את הפעילות המעכבת החזקה ביותר:

-גלוקוזידאז:IC₅₀=0.420 מ"ג/מ"ל

ליפאז לבלב:IC₅₀=0.090 מ"ג/מ"ל

הכורכומין הפגין פעילות מתונה, ואילוSargassum fusiformeתמצית הראתה עיכוב חלש יותר (IC₅₀=38.22 מ"ג/מ"ל ו-1.02 מ"ג/מ"ל).
יחס ה-IC₅₀ הממוצע היה בערך150:6:2.

3.2 ניסויים-יחידים

3.2.1 יחס של תמצית Sargassum fusiforme

עיכוב של - גלוקוזידאז ירד עם פרופורציות גבוהות יותר, בעוד עיכוב ליפאז הלבלב הגיע לשיא ביחס של 450. היחס האופטימלי שנבחר היה450.

3.2.2 יחס כורכומין

העיכוב של -גלוקוזידאז היה הגבוה ביותר ביחס של 4, ועיכוב הליפאז הלבלב הגיע לשיא ב-6. יחס הכורכומין האופטימלי שנקבע היה4.

3.2.3 יחס של Punicalagin

בתנאים קבועים (450 סרגאסום: 4 כורכומין), עלייה הדרגתית בפוניקלאגין אפשרה זיהוי של יחס אופטימלי סביב2, המהווה את הבסיס לניתוח RSM.

3.3 ניתוח משטח תגובה ואופטימיזציה

RSM הראה את ההשפעה של שלושת המרכיבים על עיכוב האנזים בדירוג כדלקמן:

עבור -גלוקוזידאז:
כורכומין > פוניקאלאגין > תמצית סרגאסום

כורכומין > תמצית סרגאסום > punicalagin

אופטימיזציה של המודל הניבה יחס מסה אידיאלי של:
150:6:3 (תמצית סרגאסום: כורכומין: פוניקאלאגין)

תוצאות העיכוב שנמדדו היו:

-גלוקוזידאז:47.77%

ליפאז לבלב:74.18%

ערכים תואמים היטב את תחזיות המודל, ומאשרים את מהימנות המודל.

3.4 עיכוב אנזים של הנוסחה האופטימלית

הנוסחה המרוכבת האופטימלית הציגה ערכי IC₅₀ של:

0.56 מ"ג/מ"לעבור -glucosidase

0.210 מ"ג/מ"לעבור ליפאז לבלב

אלה היו חזקים משמעותית מאלו שלSargassum fusiformeלבד, מה שמצביע על שיפור סינרגטי לאחר שילוב.

4 דיון

לכל אחד משלושת החומרים הפעילים יש השפעות היפוגליקמיות והיפוליפידמיות מוכרות, והנוסחה המרוכבת מדגימה פעילות סינרגטית. הפורמולה הטבעית האופטימלית בטוחה ומציגה פוטנציאל חזק להתפתחות למזונות פונקציונליים המכוונים לוויסות הגלוקוז והשומנים בדם. עם זאת, בהמשךin vivoדרושים מחקרים ועמידה בדרישות הרגולטוריות לפיתוח מוצרים עתידי.